تولیدکیموزین کامل و پردازش یافته نوترکیب درe-coli و ارزیابی میزان بیان پری پلاسمی و فعالیت آنزیماتیک آن ها

سابقه و هدف: تا سال 1990، رنت (پروتئازهایی که باعث لخته شدن شیر و تولید پنیر می شوند) با روش قدیمی از شیردان گوساله های شیرخوار، یا از منابع گیاهی و یا میکروبی تهیه می گردید. در این سال اداره غذا و داروی آمریکا اجازه تولید و مصرف کیموزین گاوی نوترکیب تولید شده توسط باکتری ها را صادر کرد. امروزه بیش از 90 درصد پنیر مصرفی در انگلستان از کیموزین نوترکیب تولید می شود. این تحقیق به منظور قطع وابستگی کشور به مایه پنیر وارداتی، بررسی بیان و عمل کرد فرم اسپلایس یافته ژن کیموزین (فرم فاقد اگزون 6) به منظور بدست آوردن آنزیم کوچک تر و فعال تر همچنین بررسی عمل کرد سیگنال pelb در هدایت پروتئین به فضای پری پلاسم باکتری e-coli انجام گردید. مواد و روش ها: با استخراج mrna از لایه پوششی معده گوساله و انجام rt-pcr دو فرم از پرپروکیموزین (فرم پردازش یافته فاقد اگزون 6 و فرم کامل پرپروکیموزین ) بدست آمد. سپس با طراحی پرایمرهای مناسب هر دو فرم پروکیموزین در وکتور بیانی pet26b کلون گردید. بیان با وسترن بلات تا یید گردید و عمل کرد آن ها بررسی شد. یافته ها: هر دو فرم ژن پروکیموزین در وکتور pet26b تولیدگردیدند. میزان تولید فرم پردازش یافته 7 برابر فرم کامل بود. هر دو فرم پروکیموزین باعث رسوب پروتئین های شیر شدند. نتیجه گیری: از آنجا که فرم پردازش یافته و کامل پروکیموزین بعد از شوک اسمزی در فضای پری پلاسمی مشاهده نشدند. بنابراین سیگنال pelb قادر به هدایت هیچ یک از آن دو به فضای پری پلاسم نیست. بنابراین بایستی سیگنال جدیدی طراحی گردد.